L'allegra brigata del Museo di Storia Naturale di New York si trova costretta ad andare in trasferta al British Museum di Londra, quando il guardiano notturno Lawrence Daley (Ben Stiller) scopre con suo grande disappunto che la magia della tavola di Ahkmenrah, capace di riportare in vita ogni sera gli ospiti del suo museo, dopo il tramonto del sole, si sta inesorabilmente esaurendo. Nella sua nuova destinazione, l'improbabile comitiva troverà nuovi alleati, come Sir Lancillotto, e nuovi pericolosi nemici da affrontare.